Презентация на тему Выделение и визуализация нуклеиновых кислот и белков

остатками нуклеотидов.

Существует два типа нуклеиновых кислот — дезоксирибонуклеиновые (ДНК)

и рибонуклеиновые (РНК). Мономерами в нуклеиновых кислотах служат нуклеотиды. Каждый из них содержит азотистое основание, пятиуглеродный сахар (дезоксирибоза — в ДНК, рибоза — в РНК) и остаток фосфорной кислоты.

Нуклеиновые кислоты ДНК и РНК присутствуют в клетках всех живых организмов и выполняют важнейшие функции по хранению, передаче и реализации наследственной информации.

азотистому основанию в их составе, — аденин (А), гуанин

(Г), цитозин (Ц) и тимин (Т).

Пары, связанные водородными связями, жестко определены: фрагмент А всегда взаимодействует с Т, а Г – с Ц. Пара А-Т связана двумя водородными связями, а пара Г-Ц – тремя связями.

том, что в основной цепи фрагменты фосфорной кислоты чередуются

с рибозой, а не с дезоксирибозой (рис.). Второе отличие – к боковому обрамлению присоединяется гетероцикл урацил (У) вместо тимина (Т), остальные гетероциклы А, Г и Ц те же, что у ДНК. Урацил отличается от тимина отсутствием метильной группы, присоединенной к циклу, на рисунке эта метильная группа выделена красным цветом.

Одна из основных функций нуклеиновых кислот состоит в детерминации синтеза белков. Информация о структуре белков, закодированная в нуклеотидной последовательности ДНК, должна передаваться от одного поколения к другому, и поэтому необходимо ее безошибочное копирование, т.е. синтез точно такой же молекулы ДНК (репликация).

исследователем всегда стоит задача выделения их из биологических объектов. 

Нуклеиновые

кислоты являются составной частью сложных белков – нуклеопротеинов, содержащихся во всех клетках животных, бактерий, вирусов, растений. 

Нуклеиновые кислоты обладают сильно выраженными кислыми свойствами (обусловлены остатками ортофосфорной кислоты в их составе) и при физиологических значениях рН несут отрицательный заряд. Этим объясняется одно из важных свойств нуклеиновых кислот – способность к взаимодействию по типу ионной связи с основными белками(гистонами), ионами металлов (преимущественно с Mg2+), а также с полиаминами (спермин, спермидин) и путресцином.

Поэтому для выделения нуклеиновых кислот из комплексов с белками необходимо прежде всего разрушить эти сильные и многочисленные электростатические связи между положительно заряженными молекула и белков и отрицательно заряженными молекулами нуклеиновых кислот.

солевыми растворами (10% раствор хлорида натрия) с оследующим осаждением нуклеиновых кислот этанолом.

В настоящее время

для выделения нуклеиновых кислот в нативном состоянии пользуются более «мягким» фенольным методом, основанным на обработке нейтрального забуференного раствора нуклеопротеинов фенолом. Обычно эту процедуру проводят в присутствии веществ, вызывающих денатурацию белкового компонента, например до-децилсульфата (ДСН) или салицилата натрия, затем смесь подвергают центрифугированию. При этом денатурированный белок попадает в фенольную фазу, а нуклеиновые кислоты остаются в водной среде, из которой их осаждают на холоде добавлением 2–3 объемов этанола.

Этим методом удается получить достаточно очищенные препараты нуклеиновых кислот.