Презентация на тему Методы диагностики вирусных инфекций

изучении больного животного, которое включает сбор анамнеза (в том

числе эпидемиологического), объективное динамическое обследование органов и систем, анализ результатов лабораторного и инструментального исследования больного.

больном и его заболевании, полученных путем опроса

из них собирается по определенному плану

проис­хождении животного, условиях его содержания, кормления, водо­поя, назначении животного,

перенесенных заболеваниях, а также о ветеринарных обработках и исследованиях

когда заболело животное;

каковы признаки заболевания;

была ли оказана животному

терапевтическая помощь, и если да, то кто, как и сколько времени лечил;

есть ли еще животные с анало­гичными признаками болезни и сколько таких животных.

(лат. habitus — внешность, наруж­ность) определяют по совокупности внешних

признаков, характе­ризующих положение тела (позу), упитанность, телосложение, кон­ституцию и темперамент животного в момент исследования.

бледность (анемию), гиперемия, желтушность (иктеричность), отсутствие сыпи (экзантемы). Если

обнаружена сыпь, нужно выяснить сроки ее появления, обратить внимание на локализацию, распространение, характер высыпных элементов (розеолы, петехии, папулы, везикулы, пустулы), скопление их на определенных участках тела (насколько это возможно у данного животного).

Уши с НСП, также, относятся к коже.

слизистых (анемия, гиперемия, иктеричность), их увлажнение, наличие повреждений, экссудация

от выявленного при осмотре

дуоденального содержимого, ликвора, эксудатов, трансудатов и других биологических жидкостей);
2)

гематологические исследования (крови, костного мозга и др.);
3) цитологические исследования;
4) биохимические исследования (во всех биологических жидкостях),
5) микробиологические исследования, включающие вирусологические методы исследования;
6) иммунологические методы (в том числе и серологическая диагностика);
7) молекулярно-генетические методы (ДНК-зондирование, полимеразно-цепная реакция — ПЦР)

а электронная микроскопия — сами вирионы и по особенностям

их строения диагностировать соответствующую инфекцию

идентификацию.
Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных

эмбрионов или культуры тканей.
Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью: • определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиуридоном); • особенностей ее строения (электронная микроскопия); • размера вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм); • наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром); • гемагглютининов (реакция гемагглютинации); • типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

(РИА); • иммуноферментный анализ (ИФА); • реакция иммунофлюоресценции (РИФ); • реакция связывания

комплемента (РСК); • реакция пассивной гемагглютинации (РПГА); • реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.

специфичности и высокой степени избирательности иммунологической реакции "антиген-антитело".

Принято

различать несколько десятков вариаций ИФА (прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный). Наибольшей популярностью пользуется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

90%).
Возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть

сравнивание количества антител в разных временных промежутках.
Доступность ИФА-диагностики в любом медицинском учреждении

возбудителя.

вырабатываемые B -лимфоцитами в ответ на попадание в организм

инфекционного агента

Антигены – высокомолекулярные вещества органического происхождения, в частности возбудителей инфекционных и других заболеваний, а также вещества различных измененных клеток, образующихся при той или иной болезни (аутоиммунные заболевания, онкология).

Иммунный комплекс – комплекс антиген-антитело, участвующий в иммунном процессе.

антитела с образованием иммунного комплекса антиген-антитело, в результате которого

происходит изменение ферментативной активности специфических меток
на поверхности антител

антиген определенного возбудителя. При добавлении биологического материала (сыворотки крови)

пациента происходит реакция между этим антигеном и искомым антителом (иммуноглобулином). Это соединение будет выступать «особым антигеном» в следующем этапе.

2) На данном этапе идет образование ИК (иммунных комплексов) - реакция между «особым антигеном» и конъюгатом (иммуноглобулин, меченый ферментом пероксидазой). Добавляется особый хромоген. Результатом такой ферментативной реакции является образование окрашенного вещества в лунке планшета, интенсивность окраски которого зависит от количества содержащихся в материале пациента иммуноглобулинов (антител).

3) Далее происходит оценка результата: фотометрирование с помощью многоканального спектрофотометра, сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб, математическая обработка результатов.

Хьелль Клеппе предложил способ амплификации ДНК с помощью пары

коротких одноцепочных молекул ДНК, но идея осталась не реализованной



Изобретена в 1983 году

Кэри Мюллисом (Kary Mullis)

(с помощью ДНК-полимеразы), осуществляющей синтез взаимно комплементарных цепей ДНК.

Возможность получения огромного количества копий одного строго определённого
участка генома
значительно
упрощает
исследование
имеющегося
образца ДНК.

последующая комплементарная достройка обеих с помощью специального фермента Taq-полимеразы

на олигонуклеотидную затравку (праймер)
Элонгация (синтез).
Синтез комплементарной цепи ДНК

выделения берут с помощью ватных палочек (лучше-стерильных), помещают в

пробирки Эппендорфа, с 0,5 мл физраствора (обрезая пластиковую палочку или обламывая деревянную). Кровь :
ИФА – сыворотка крови (биохимическая пробирка)
ПЦР – цельная кровь с ЭДТА
Материал для анализов доставляется в лабораторию в день взятия или на следующий день. Допускается хранение в холодильнике (4оС) в течение 1-2 дней.

Нельзя сдавать кровь с гепарином на ПЦР!