Что такое findslide.org?

FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.


Для правообладателей

Обратная связь

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Яндекс.Метрика

Презентация на тему Трансгенез. Животные

Содержание

СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и сперматозоида) Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя (преимплантационная) стадия развития зародыша млекопитающих (в том числе человека
ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ. Лекция 7 СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и сперматозоида) Что означает термин «трансгенные животные»? humbio.ruТрофобласт – наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации и 1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота)  2. Зигота делится надвое  3-4. Митотическое деление продолжается  5. Через 5-6 дней Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)Создание и амплификация rДНК В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом сидели Схемы получения трансгенных животныхМикроинъекция в зиготумикроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку (зиготу)1. 1. встроился ли трансген в геном?2. несут ли трансген гаметы?3. экспрессируется ли трансген?Основные проблемы Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости Схемы получения трансгенных животныхРеконструкция эмбрионов с использованием ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)микроинъекция чужеродной http://www.stemcells.ox.ac.ukИнъекция в бластоцистуhttp://www.tankonyvtar.hu/ Способы введения днк в культивируемые клетки животныхРекомбинантные РНК-вирусы Клетка с помощью рецепторов Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных рисунок из книги Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004 Способы введения днк в культивируемые клетки животныхПеренос генов, опосредованный клеточными рецепторамиоснован на Способы введения днк в культивируемые клетки животныхЭлектропорация.  Кратковременное (10 мксек-100 мсек) Основные стратегии в трансгенезе животных.  Внедрение в практику.Создание новых животных, с Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки  (например, сообщалось о Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.  (например, из стволовых Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным «томам» Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика Схема получения библиотеки кДНК ДНК-зонды alko-mir.ru ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем или ДНК-зонды. Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)Зонды с резонансным переносом энергии Схема получения кДНК. http://bannikov.narod.ru/ Генная терапияв генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:лентивирусоваденовирусоваденоассоциированных вирусовортопоксвирусовгерпесвирусовРНК-вирусов, не относящихся к ретровирусамhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/ Сравнение свойств генотерапевтических векторных системhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/ Словарь Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной рекомбинации Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного вектора Методы модификации вирусовфизический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей ее http://www.mun.ca Успехи и неудачи генной терапии17 сентября 2000 г. в Университете Пенсильвании умер
Слайды презентации

Слайд 2 Словарь
Зигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения

СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и

(слияния яйцеклетки и сперматозоида)

Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя

(преимплантационная) стадия развития зародыша млекопитающих (в том числе человека

Слайд 3 Что означает термин «трансгенные животные»?

Что означает термин «трансгенные животные»?

Слайд 4 humbio.ru
Трофобласт –
наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает

humbio.ruТрофобласт – наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации

участие в имплантации и формировании плаценты
Синцитиотрафобласт – выполняет функцию

всасывания питательных веществ из крови матери, вырабатывает ферменты, способствующие внедрению ворсин хориона в ткани матки

Слайд 5 1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота)  2. Зигота делится надвое  3-4. Митотическое деление продолжается  5. Через 5-6

1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота)  2. Зигота делится надвое  3-4. Митотическое деление продолжается  5. Через 5-6

дней образуется бластоциста 6. Внутреннюю часть бластоцисты (ВКМ) помещают на питательную

среду для получения стволовых клеток

http://www.vokrugsveta.ru


Слайд 6 Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)
Создание

Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)Создание и амплификация

и амплификация rДНК (кассета экспрессии+вектор)
Выбор и подготовка клеток-реципиентов для

трансформации
Встраивание трансгена в геном клетки-реципиента
Отбор трансгенных организмов
Отбор трансгенных организмов, образующих трансгенные гаметы
Получение чистых линий
Оценка экспрессии гена

Слайд 7 В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию,

В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом

на которой рядом сидели две мыши. Одна из них

была трансгенной, в ее ДНК встроили ген гормона роста крысы, другая была обычной мышкой. 

Металлотионеин - белок, способный связывать двухвалентные металлы. Регулирует концентрацию в клетке микроэлементов (цинк и медь).


Слайд 8 Схемы получения трансгенных животных
Микроинъекция в зиготу
микроинъекция чужеродной ДНК

Схемы получения трансгенных животныхМикроинъекция в зиготумикроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку

в оплодотворенную яйцеклетку (зиготу)
1. Создание и клонирование кассеты экспрессии

составе вектора клонируется в E. Coli
2. Получение одноклеточных зигот
3. Выделяние rДНК, переведение в линеарную форму, инъецирование в пронуклеус зиготы.
4. пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
5. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://www.transgen.ru


Слайд 9 1. встроился ли трансген в геном?
2. несут ли

1. встроился ли трансген в геном?2. несут ли трансген гаметы?3. экспрессируется ли трансген?Основные проблемы

трансген гаметы?
3. экспрессируется ли трансген?
Основные проблемы


Слайд 10 Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей

Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости

с помощью микроинъекций
MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости


Слайд 11 Схемы получения трансгенных животных
Реконструкция эмбрионов с использованием
ЭСК

Схемы получения трансгенных животныхРеконструкция эмбрионов с использованием ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)микроинъекция

(эмбриональных стволовых клеток)
микроинъекция чужеродной ДНК в ЭСК
1. Получение культуры

ЭСК
2. Введение в ЭСК rДНК с селективных маркером (с помощью ретровирусов, электропорации, липосом)
3. Получение бластоцист для микроинъекции
4. Конструирование химерных эмбрионов
5. Пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
6. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://rudocs.exdat.com


Слайд 12 http://www.stemcells.ox.ac.uk
Инъекция в бластоцисту
http://www.tankonyvtar.hu/

http://www.stemcells.ox.ac.ukИнъекция в бластоцистуhttp://www.tankonyvtar.hu/

Слайд 13 Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Рекомбинантные РНК-вирусы

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхРекомбинантные РНК-вирусы Клетка с помощью


Клетка с помощью рецепторов опознает вирусную оболочку.
Вирус внедряет

в клетку РНК.
В клетке РНК с помощью ревертазы переписывается в ДНК
ДНК проникает в ядро соматической клетки.
ДНК встраивается в ДНК клетки.
Клетка синтезирует копии обновленного генома и мРНК.
Белки транслируются
РНК вируса одеваются вирусной оболочкой
выходят из клетки, заражая новые поколения клеток.

moikompas.ru

Перенос генов с помощью вирусов
(Эффективные векторы созданы на основе ретровирусов, вирусов SV40, аденовирусов, аденоассоциированных вирусов, вируса осповакцины, вируса герпеса и др.)


Слайд 14 Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных

рисунок

Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных рисунок из книги Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004

из книги Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004


Слайд 15 Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Перенос генов,

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхПеренос генов, опосредованный клеточными рецепторамиоснован

опосредованный клеточными рецепторами
основан на интернализации рецепторов в процессе эндоцитоза



Слайд 16 Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Электропорация.

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхЭлектропорация. Кратковременное (10 мксек-100 мсек)


Кратковременное (10 мксек-100 мсек) воздействие электрическим полем высокой напряженности

(50-1500 V/см), вызывает локальное нарушение целостности мембран с образованием микропор (диаметр 20-120 нм), через которые заряженные молекулы, в том числе и ДНК, как линейная, так и суперскрученная, проникают внутрь клеток

Слайд 17 Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.
Создание

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.Создание новых животных, с

новых животных, с улучшенными качественными и количественными характеристиками

(лосось с трансгеном гормона роста)

Слайд 18 Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным

Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов

содержанием некоторых компонентов
(например, в Великобритании существует

стадо коров, молоко которых подходит для приготовления сыра чеддер).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.


Слайд 19 Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки

Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки (например, сообщалось о


(например, сообщалось о получении свиней, способных продуцировать интерферон

человека).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.


Слайд 20 Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.

Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов. (например, из стволовых


(например, из стволовых эмбриональных клеток животных вырастили глаза

и уши лягушки).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.


Слайд 21 Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека,

Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным

распределенное по отдельным «томам» рекомбинантных молекул плазмид или фаговых

частиц «в суперобложке» бактерии E.coli.

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.


Слайд 22 Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Слайд 23 Схема получения библиотеки кДНК

Схема получения библиотеки кДНК

Слайд 24 ДНК-зонды
alko-mir.ru
ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент

ДНК-зонды alko-mir.ru ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем

ДНК, меченный тем или иным образом и использующийся для

гибридизации со специфическим участком молекулы ДНК. Позволяет идентифицировать комплементарные ему нуклеотидные последовательности.

Слайд 25 ДНК-зонды.
Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)
Зонды

ДНК-зонды. Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)Зонды с резонансным переносом

с резонансным переносом энергии (LightCycler assay)
Концевые последовательности зонда комплементарны

и образуют шпильки, что гасит свечение. Зонды, которые отжигаются на матрицу, разворачиваются, и флуоресцентная метка и гаситель расходятся в разные стороны - увеличивается свечение.

Принцип метода в переносе энергии от одного флуорофора (на 3` конце первого зонда), ко второму флуорофору (на 5` конце второго зонда). При связывании зондов с ДНК матрицей испускаемое первым флуорофором излучение передается на второй флуорофор, а его излучение детектируется прибором.

http://www.interlabservice.ru/


Слайд 26 Схема получения кДНК.
http://bannikov.narod.ru/

Схема получения кДНК. http://bannikov.narod.ru/

Слайд 27 Генная терапия
в генной терапии наследственных болезней применяют векторные

Генная терапияв генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:лентивирусоваденовирусоваденоассоциированных вирусовортопоксвирусовгерпесвирусовРНК-вирусов, не относящихся к ретровирусамhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/

системы на основе:
лентивирусов
аденовирусов
аденоассоциированных вирусов
ортопоксвирусов
герпесвирусов
РНК-вирусов, не относящихся к ретровирусам
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/


Слайд 28 Сравнение свойств генотерапевтических векторных систем
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Сравнение свойств генотерапевтических векторных системhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 29 Словарь
Таргетинг (target - мишень) – изменение генов

Словарь Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной

за счет гомологичной рекомбинации последовательностей, находящихся в хромосоме, с

искусственно введенными в клетку последовательностями ДНК

Упаковывающая клетка – линия клеток, созданная для продуцирования (упаковки) вирусных частиц, не содержащих инфекционных нуклеиновых кислот.



Слайд 30 Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов
1. Клонирование гена

Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного

в ДНК ретровирусного вектора в клетках E.coli. 
2. Перенос ДНК ретровирусного

вектора в упаковывающие клетки. 
3.Формирование ретровирусных частиц и их выход в культу ральную среду.
4. Трансдукция гена в составе ретровирусного вектора в клетки-мишени.

http://supotnitskiy.webspecialist.ru/


Слайд 31 Методы модификации вирусов
физический таргетинг – покрытие вирусной частицы

Методы модификации вирусовфизический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей

специальной оболочкой, изменяющей ее природный тропизм и делающей ее

неузнаваемой для иммунной системы человека
генетическая модификация вируса – модификация белков оболочки вектора
транскрипциональный таргетинг – введение в трансген-экспрессирующую кассету специфических для данных тканей промоторных последовательностей.

Слайд 32 http://www.mun.ca

http://www.mun.ca

  • Имя файла: transgenez-zhivotnye.pptx
  • Количество просмотров: 99
  • Количество скачиваний: 0